(Flow cytometry, FCM) — це аналізатор клітин, який вимірює інтенсивність флуоресценції пофарбованих клітинних маркерів. Це високотехнологічна технологія, розроблена на основі аналізу та сортування окремих клітин. Він може швидко виміряти та класифікувати розмір, внутрішню структуру, ДНК, РНК, білки, антигени та інші фізичні чи хімічні властивості клітин, і може базуватися на колекції цих класифікацій.
Проточний цитометр в основному складається з наступних п'яти частин:
1 Проточна камера та рідинна система
2 Лазерне джерело світла та система формування променя
3 Оптична система
4 Електроніка, система зберігання, відображення та аналізу
5 Система сортування клітин
Серед них лазерне збудження в лазерному джерелі світла та системі формування променя є основним вимірюванням сигналів флуоресценції в проточній цитометрії. Інтенсивність збуджуючого світла та час експозиції пов’язані з інтенсивністю сигналу флуоресценції. Лазер — це когерентне джерело світла, яке може забезпечити однохвильове, високоінтенсивне та стабільне освітлення. Це ідеальне джерело збуджуючого світла для задоволення цих вимог.
Між джерелом лазера і проточною камерою є дві циліндричні лінзи. Ці лінзи фокусують лазерний промінь з круглим поперечним перерізом, що випромінюється від лазерного джерела, в еліптичний промінь з меншим поперечним перерізом (22 мкм × 66 мкм). Лазерна енергія всередині цього еліптичного променя розподіляється відповідно до нормального розподілу, забезпечуючи постійну інтенсивність освітлення для клітин, що проходять через зону виявлення лазера. З іншого боку, оптична система складається з кількох наборів лінз, точкових отворів і фільтрів, які можна грубо розділити на дві групи: перед і після проточної камери.
Оптична система перед проточною камерою складається з лінзи та отвору. Основною функцією лінзи та отвору (зазвичай двох лінз і отвору) є фокусування лазерного променя з круглим поперечним перерізом, випромінюваного джерелом лазера, в еліптичний промінь з меншим поперечним перерізом. Це розподіляє енергію лазера відповідно до нормального розподілу, забезпечуючи постійну інтенсивність освітлення клітин у зоні виявлення лазера та мінімізуючи перешкоди від розсіяного світла.
Існує три основних типи фільтрів:
1: Фільтр довгого проходу (LPF) – пропускає лише світло з довжиною хвилі, вищою за певне значення.
2: Фільтр короткого проходу (SPF) – пропускає лише світло з довжиною хвилі нижче певного значення.
3: Смуговий фільтр (BPF) - пропускає світло лише в певному діапазоні довжин хвиль.
Різні комбінації фільтрів можуть направляти сигнали флуоресценції на різних довжинах хвиль на окремі фотоелектронні помножувачі (ФЕУ). Наприклад, фільтри для виявлення зеленої флуоресценції (FITC) перед ФЕУ - це LPF550 і BPF525. Фільтри, які використовуються для виявлення оранжево-червоної флуоресценції (PE) перед ФЕУ, це LPF600 і BPF575. Фільтри для виявлення червоної флуоресценції (CY5) перед ФЕУ — LPF650 і BPF675.
Проточна цитометрія в основному використовується для сортування клітин. З розвитком комп’ютерних технологій, розвитком імунології та винаходом технології моноклональних антитіл, їх застосування в біології, медицині, фармації та інших галузях стає все більш поширеним. Ці програми включають аналіз динаміки клітин, апоптоз клітин, типування клітин, діагностику пухлин, аналіз ефективності ліків тощо.
Час публікації: 21 вересня 2023 р
