(Проточна цитометрія, FCM) - це клітинний аналізатор, який вимірює інтенсивність флуоресценції забарвлених клітинних маркерів. Це високотехнологічна технологія, розроблена на основі аналізу та сортування одиночних клітин. Він може швидко вимірювати та класифікувати розмір, внутрішню структуру, ДНК, РНК, білки, антигени та інші фізичні або хімічні властивості клітин і можуть базуватися на збору цих класифікацій.
Проточний цитометр в основному складається з наступних п'яти частин:
1 Система проточної камери та Fluidics
2 Лазерне джерело світла та система формування променя
3 Оптична система
4 Система електроніки, зберігання, дисплея та аналізу
5 Система сортування клітин
Серед них лазерне збудження в лазерному джерелі світла та системи формування променів є основним вимірюванням сигналів флуоресценції в проточній цитометрії. Інтенсивність світла збудження та час експозиції пов'язані з інтенсивністю сигналу флуоресценції. Лазер-це когерентне джерело світла, яке може забезпечити однохвильову, високу інтенсивність та високу стабільність. Це ідеальне джерело світла для задоволення цих вимог.
Між лазерним джерелом та проточною камерою є два циліндричні лінзи. Ці лінзи зосереджують лазерний промінь із круговим поперечним перерізом, що випромінюється з лазерного джерела в еліптичний промінь з меншим поперечним перерізом (22 мкм × 66 мкм). Лазерна енергія всередині цього еліптичного променя розподіляється відповідно до нормального розподілу, забезпечуючи послідовну інтенсивність освітлення для клітин, що проходять через область виявлення лазера. З іншого боку, оптична система складається з декількох наборів лінз, шпильок та фільтрів, які можуть бути приблизно розділені на дві групи: вгору і вниз за течією проточної камери.
Оптична система перед потоковою камерою складається з об'єктива та шпильки. Основна функція об'єктива та шпильки (як правило, дві лінзи та пінопласт)-фокусувати лазерний промінь з круглим поперечним перерізом, що випромінюється лазерним джерелом в еліптичний промінь з меншим поперечним перерізом. Це розподіляє лазерну енергію відповідно до нормального розподілу, забезпечуючи постійну інтенсивність освітлення для клітин по всій області виявлення лазера та мінімізації перешкод від бродячого світла.
Існує три основні типи фільтрів:
1: Фільтр довгих проходів (LPF) - дозволяє проходити світло лише з довжиною хвилі, що перевищує певне значення.
2: Фільтр короткого пропуску (SPF) - дозволяє лише світло з довжиною хвилі нижче конкретного значення проходити.
3: Фільтр смуги (BPF) - дозволяє проходити світло лише в певному діапазоні довжин хвиль.
Різні комбінації фільтрів можуть спрямовувати сигнали флуоресценції на різних довжинах хвиль до окремих труб фотопомносних (PMTS). Наприклад, фільтри для виявлення зеленої флуоресценції (FITC) перед ПМТ - LPF550 та BPF525. Фільтри, що використовуються для виявлення флуоресценції помаранчевої червоної (PE) перед ПМТ,-LPF600 та BPF575. Фільтри для виявлення червоної флуоресценції (CY5) перед ПМТ - LPF650 та BPF675.
Проточна цитометрія в основному використовується для сортування клітин. З розвитком комп'ютерних технологій, розвитку імунології та винаходом технології моноклональних антитіл, його застосування в біології, медицині, аптеці та інших галузях стають все більш поширеними. Ці програми включають аналіз динаміки клітин, апоптоз клітин, типізування клітин, діагностику пухлини, аналіз ефективності лікарських засобів тощо.
Час посади: вересень-21-2023
