(Проточна цитометрія, FCM) – це аналізатор клітин, який вимірює інтенсивність флуоресценції забарвлених клітинних маркерів. Це високотехнологічна технологія, розроблена на основі аналізу та сортування окремих клітин. Вона дозволяє швидко вимірювати та класифікувати розмір, внутрішню структуру, ДНК, РНК, білки, антигени та інші фізичні або хімічні властивості клітин, і може базуватися на колекції цих класифікацій.
Проточний цитометр складається переважно з наступних п'яти частин:
1 Проточна камера та система флюїдики
2 Джерело лазерного світла та система формування променя
3 Оптична система
4 Електроніка, система зберігання, відображення та аналізу
5 Система сортування клітин
Серед них лазерне збудження в джерелі лазерного світла та системі формування променя є основним вимірюванням сигналів флуоресценції в проточній цитометрії. Інтенсивність збуджувального світла та час експозиції пов'язані з інтенсивністю сигналу флуоресценції. Лазер - це когерентне джерело світла, яке може забезпечити освітлення з однією довжиною хвилі, високою інтенсивністю та високою стабільністю. Це ідеальне джерело збуджувального світла, яке відповідає цим вимогам.
Між лазерним джерелом та проточною камерою розташовані дві циліндричні лінзи. Ці лінзи фокусують лазерний промінь із круглим поперечним перерізом, що випромінюється лазерним джерелом, в еліптичний промінь із меншим поперечним перерізом (22 мкм × 66 мкм). Лазерна енергія в цьому еліптичному промені розподіляється за нормальним розподілом, забезпечуючи стабільну інтенсивність освітлення клітин, що проходять через зону лазерного детектування. З іншого боку, оптична система складається з кількох наборів лінз, точечних отворів та фільтрів, які можна умовно розділити на дві групи: перед проточною камерою та після неї.
Оптична система перед проточною камерою складається з лінзи та отвору. Основна функція лінзи та отвору (зазвичай дві лінзи та отвір) полягає у фокусуванні лазерного променя з круглим поперечним перерізом, що випромінюється лазерним джерелом, в еліптичний промінь з меншим поперечним перерізом. Це розподіляє лазерну енергію відповідно до нормального розподілу, забезпечуючи рівномірну інтенсивність освітлення комірок по всій зоні виявлення лазера та мінімізуючи перешкоди від розсіяного світла.
Існує три основні типи фільтрів:
1: Довгопрохідний фільтр (ФНЧ) – пропускає лише світло з довжинами хвиль, що перевищують певне значення.
2: Короткопропускний фільтр (SPF) – пропускає лише світло з довжинами хвиль нижче певного значення.
3: Смуговий фільтр (СФ) – пропускає лише світло певного діапазону довжин хвиль.
Різні комбінації фільтрів можуть направляти сигнали флуоресценції на різних довжинах хвиль до окремих фотопомножувачів (ФЕП). Наприклад, фільтри для виявлення зеленої флуоресценції (FITC) перед ФЕП - це LPF550 та BPF525. Фільтри, що використовуються для виявлення оранжево-червоної флуоресценції (PE) перед ФЕП, - це LPF600 та BPF575. Фільтри для виявлення червоної флуоресценції (CY5) перед ФЕП - це LPF650 та BPF675.
Проточна цитометрія в основному використовується для сортування клітин. З розвитком комп'ютерних технологій, розвитком імунології та винаходом технології моноклональних антитіл, її застосування в біології, медицині, фармації та інших галузях стає все більш поширеним. Ці застосування включають аналіз клітинної динаміки, апоптоз клітин, типізацію клітин, діагностику пухлин, аналіз ефективності ліків тощо.
Час публікації: 21 вересня 2023 р.
